原代分離是指從活體組織(如動(dòng)物器官、組織或人體活檢樣本等)中，通過特定的方法將細(xì)胞從其原有的組織結(jié)構(gòu)中釋放出來，并去除雜質(zhì)和非目標(biāo)細(xì)胞，從而獲得較為純凈的單一細(xì)胞群體或混合細(xì)胞群體的過程。這些分離得到的細(xì)胞被稱為原代細(xì)胞，它們保留了來源組織細(xì)胞的許多生物學(xué)特性和功能，更接近體內(nèi)細(xì)胞的真實(shí)狀態(tài)。

　　研究細(xì)胞真實(shí)生理功能：與傳代多次的細(xì)胞系相比，原代細(xì)胞更能準(zhǔn)確反映體內(nèi)細(xì)胞的生理狀態(tài)和功能。通過原代分離獲得的細(xì)胞，可以用于研究細(xì)胞在正常生理?xiàng)l件下的代謝、增殖、分化、信號(hào)傳導(dǎo)等過程，為深入理解細(xì)胞的生物學(xué)行為提供可靠依據(jù)。

　　藥物篩選與毒性評(píng)價(jià)：原代細(xì)胞具有較高的生物相關(guān)性，在藥物篩選和毒性評(píng)價(jià)方面具有特殊優(yōu)勢(shì)。使用原代細(xì)胞進(jìn)行藥物測(cè)試，可以更準(zhǔn)確地預(yù)測(cè)藥物在體內(nèi)的療效和安全性，減少動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的使用，降低研發(fā)成本和周期。

　　原代分離的常用方法：

　　(一)酶消化法

　　原理：利用酶的特異性降解作用，破壞細(xì)胞間質(zhì)和細(xì)胞外基質(zhì)中的蛋白質(zhì)、多糖等成分，使細(xì)胞從組織中分離出來。常用的酶包括胰蛋白酶、膠原酶、透明質(zhì)酸酶等，不同類型的組織需要選擇合適的酶組合和消化條件。

　　操作步驟：首先將組織切成小塊，用無鈣鎂離子的緩沖液清洗去除血液和雜質(zhì);然后將組織塊置于含有適量酶的消化液中，在適宜的溫度(通常為37℃)和振蕩條件下進(jìn)行消化;消化過程中需密切觀察組織塊的消化情況，當(dāng)組織塊變得松散、細(xì)胞開始分散時(shí)，立即加入含有血清的培養(yǎng)液終止消化;通過離心、過濾等方法收集細(xì)胞懸液，去除未消化的組織碎片和酶液。

　　(二)機(jī)械分散法

　　原理：通過物理手段(如剪切、研磨、擠壓等)破壞組織結(jié)構(gòu)，使細(xì)胞分散開來。這種方法適用于一些質(zhì)地較軟、細(xì)胞間連接相對(duì)疏松的組織，如腦組織、脂肪組織等。

　　操作步驟：將組織塊放在平皿中，用眼科剪或手術(shù)刀將其剪碎成較小的顆粒;然后將剪碎的組織轉(zhuǎn)移至注射器內(nèi)，用適當(dāng)?shù)尼橆^反復(fù)抽吸，使組織進(jìn)一步分散;也可以使用研缽和杵子對(duì)組織進(jìn)行研磨，但要注意控制力度，避免過度損傷細(xì)胞;最后將分散后的組織懸液通過篩網(wǎng)過濾，去除較大的組織塊，得到細(xì)胞懸液。

　　(三)組織塊培養(yǎng)法

　　原理：將組織塊直接接種到培養(yǎng)容器中，讓組織塊中的細(xì)胞自然遷移出來并在培養(yǎng)基中生長(zhǎng)繁殖。這種方法適用于一些具有較強(qiáng)遷移能力的細(xì)胞，如成纖維細(xì)胞、上皮細(xì)胞等。

　　操作步驟：將組織塊用無菌生理鹽水或培養(yǎng)液清洗干凈后，用眼科剪將其剪成約1mm的小塊;用鑷子將組織塊均勻地接種到培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿的底部，組織塊之間保持適當(dāng)?shù)木嚯x;輕輕翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)容器，使培養(yǎng)液覆蓋組織塊，但不要讓組織塊浸沒在培養(yǎng)液中，以利于細(xì)胞從組織塊中遷移出來;將培養(yǎng)容器置于37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，定期觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，待細(xì)胞生長(zhǎng)形成單層后進(jìn)行傳代培養(yǎng)。