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簡要描述：原代分離是指將生物體組織或器官或細胞，從體內(nèi)或體外分離出來，使其與生物體分離，進而培養(yǎng)生長，同時與生物體的變化無關(guān)。原代分離對于生物學的研究有著重要的意義，可以獲得大量的細胞或組織的原始文化，研究其生長和分化、代謝、功能等方面的特性。
更新時間：2024-10-26 00:00:00
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原代分離是指將生物體組織或器官或細胞，從體內(nèi)或體外分離出來，使其與生物體分離，進而培養(yǎng)生長，同時與生物體的變化無關(guān)。原代分離對于生物學的研究有著重要的意義，可以獲得大量的細胞或組織的原始文化，研究其生長和分化、代謝、功能等方面的特性。
一、 懸浮細胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，簡單的方法是采用10000 min的低速離心10分鐘，若懸液量大，可適當延長離心時間，但速度不能太高，延時也不能太長，以避免擠壓或機械損傷細胞，離心沉淀用無鈣、鎂PBS洗兩次，用培養(yǎng)基洗- -次后，調(diào)整適當細胞濃度后再分瓶培養(yǎng),若選用懸液中某些細胞，常采用離心后的細胞分層液，因為，經(jīng)離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層,這樣可根據(jù)需要收獲目的細胞。不同比重的分層液的配制和具體分離方法詳見淋巴細胞分離培養(yǎng)的章節(jié)。
二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料，由于細胞間結(jié)合緊密,為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可采用機械分散法(物理裂解)和消化分離法。
(一)機械分散法
所取材料若纖維成分很少，如腦組織，部分胚胎組織可采用剪刀剪切、用吸管吹打分散組織細胞或?qū)⒁殉浞旨羲榉稚⒌慕M織放在注射器內(nèi)(用九號針) ,使細胞通過針頭壓出，或在不銹鋼紗網(wǎng)內(nèi)用鈍物壓擠(常用注射器鈍端)使細胞從網(wǎng)孔中壓擠出。此法分離細胞雖然簡便、快速，但對組織機械損傷大，而且細胞分散效果差。此法僅適用于處理纖維成分少的軟組織。
(二)消化分離法
組織消化法是把組織剪切成較小團塊(或糊狀)，應用酶的生化作用和非酶的化學作用進一步使細胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動，使團塊膨松,由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養(yǎng)后,細胞容易貼壁生長。
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