一、小鼠感染模型構(gòu)建實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)核心要素

1. 明確研究目標(biāo)

• 基礎(chǔ)機(jī)制研究（如免疫逃逸）→ 需高分辨率檢測(cè)（單細(xì)胞測(cè)序、多色流式）

• 治療評(píng)價(jià)（如抗生素）→ 需設(shè)定明確的療效終點(diǎn)（生存率、組織載量降低倍數(shù)）

2. 小鼠選擇策略

• 6-8周齡（標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)） vs. 老齡鼠（模擬年齡相關(guān)免疫衰退）

• 常規(guī)研究：C57BL/6（Th1傾向）、BALB/c（Th2傾向）

• 免疫缺陷模型：SCID、NOD-scid、NSG（適合人源化感染研究）

• 品系：

• 年齡：

• 性別：雌性可能對(duì)某些病原體更敏感（如HSV-2）

3. 病原體關(guān)鍵參數(shù)

• 臨床分離株（如SARS-CoV-2 Delta變異株） vs. 實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)株（如鼠適應(yīng)流感病毒PR8）

• 保存條件：病毒需-80℃分裝避免反復(fù)凍融，部分細(xì)菌需活菌傳代保持毒力

二、小鼠感染模型構(gòu)建精準(zhǔn)感染技術(shù)（以呼吸道VS全身感染為例）

1. 呼吸道感染（以流感病毒為例）

• 麻醉優(yōu)化：
  使用酮胺/甲苯噻嗪混合麻醉（比異fu烷更持久），防止鼻內(nèi)接種時(shí)嗆咳

• 接種體積：

• 鼻內(nèi)滴注：≤50μL（避免窒息）

• 氣溶膠：使用Glas-Col系統(tǒng)，控制粒徑1-3μm直達(dá)肺泡

• 劑量控制：
  預(yù)實(shí)驗(yàn)測(cè)試100-10^4 PFU梯度，選擇導(dǎo)致20%體重下降的劑量（非致死性模型）

2. 全身性感染（以敗血癥模型為例）

• CLP（盲腸結(jié)扎穿孔）：

• 16G針頭穿孔2次模擬重度敗血癥

• 術(shù)后需皮下補(bǔ)液（1mL生理鹽水）

• 細(xì)菌靜脈接種：

• 金黃色葡tao球菌（1×10^7 CFU/尾靜脈）→ 監(jiān)測(cè)血培養(yǎng)陽(yáng)性時(shí)間

三、動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)方案設(shè)計(jì)

特殊模型需求：

• 持續(xù)性感染（如HBV）：需使用 hydrodynamic injection 遞送HBV基因組

• 慢性炎癥模型：反復(fù)低劑量感染（如每周1次鼻內(nèi)接種支原體）

四、對(duì)照設(shè)置進(jìn)階策略

1. 遺傳背景對(duì)照：

• 用IFNAR1-/-小鼠驗(yàn)證I型干擾素的作用

2. 微生物組干擾控制：

• 抗生素預(yù)處理后定植單一菌群（如人源糞菌移植）

3. 治療對(duì)照：

• 設(shè)置亞治療劑量組（如0.5×MIC抗生素）觀察反彈現(xiàn)象

五、關(guān)鍵問(wèn)題解決方案

• 感染不均一性：
  采用混勻組織勻漿后梯度稀釋培養(yǎng)（非單點(diǎn)取樣）

• 免疫過(guò)度激活干擾：
  使用TLR4突變小鼠（C3H/HeJ）研究?jī)?nèi)毒素非依賴途徑

• 模型人源化不足：
  人ACE2轉(zhuǎn)基因小鼠或造血系統(tǒng)人源化小鼠（HIV研究）

六、前沿技術(shù)整合

1. 單細(xì)胞感染動(dòng)力學(xué)：
   使用REPLICON-seq技術(shù)追蹤單個(gè)細(xì)胞內(nèi)病原體復(fù)制

2. 局部微環(huán)境分析：
   激光捕獲顯微切割（LCM）分離感染灶進(jìn)行空間轉(zhuǎn)錄組分析

3. 人工智能預(yù)測(cè)：
   訓(xùn)練深度學(xué)習(xí)模型根據(jù)早期臨床評(píng)分預(yù)測(cè)疾病結(jié)局