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腦脊髓炎動物模型構(gòu)建

簡要描述:腦脊髓炎動物模型構(gòu)建:構(gòu)建腦脊髓炎(Encephalomyelitis)動物模型是研究多發(fā)性硬化(MS)、感染性腦炎或自身免疫性中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的重要工具

  • 更新時間:2025-07-11 09:14:48
  • 訪  問  量:250

詳細(xì)介紹

腦脊髓炎動物模型構(gòu)建

一、實(shí)驗性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)模型

(模擬多發(fā)性硬化/MS)

1. 經(jīng)典誘導(dǎo)方法

模型類型適用動物抗原與佐劑疾病進(jìn)程
主動免疫EAEC57BL/6小鼠MOG??-??肽(100-200 μg)
- 完q弗氏佐劑(CFA)+ 百日咳毒素(PTx,200 ng)
慢性進(jìn)展性,12-14天發(fā)病

SJL/J小鼠PLP???-???肽(50-100 μg)
- CFA + PTx
復(fù)發(fā)-緩解型,7-10天發(fā)病
過繼轉(zhuǎn)移EAEB6/SJL小鼠- 體外用MOG激活T細(xì)胞,靜脈回輸(5×10?個細(xì)胞)快速發(fā)病(3-5天),避免佐劑干擾

2. 關(guān)鍵步驟

  • 免疫方案

    • 皮下注射抗原乳化液(脊柱兩側(cè)4點(diǎn),共100 μL)。

    • PTx腹腔注射(0天及2天,各200 ng)。

  • 疾病評分(0-5分標(biāo)準(zhǔn)):

0: 無癥狀  

1: 尾部無力  

2: 后肢輕癱  

3: 后肢完q癱瘓  

4: 四肢癱瘓  

5: 瀕死狀態(tài)

3. 注意事項

  • 品系差異:C57BL/6小鼠需PTx增強(qiáng)血腦屏障穿透,SJL/J小鼠易復(fù)發(fā)。

  • 病理驗證:脊髓切片LFB染色(脫髓鞘)、CD4+ T細(xì)胞浸潤(免疫組化)。


二、病毒性腦脊髓炎模型

(如西尼羅河病毒、單純皰疹病毒等)

1. 西尼羅河病毒(WNV)模型

  • 動物:C57BL/6小鼠(6-8周齡)。

  • 方法

    • 腳墊注射WNV(103-10? PFU),3-7天后出現(xiàn)神經(jīng)癥狀(震顫、癱瘓)。

  • 檢測

    • 腦組織病毒載量(qPCR)、神經(jīng)元死亡(Fluoro-Jade C染色)。

2. 單純皰疹病毒(HSV-1)腦炎模型

  • 方法

    • 鼻腔接種HSV-1(10? PFU),病毒沿嗅神經(jīng)入腦。

  • 病理

    • 海馬和皮層炎癥(Iba1+小膠質(zhì)細(xì)胞活化)、病毒抗原(HSV-gB染色)。


三、細(xì)菌/寄生蟲性腦脊髓炎模型

1. 結(jié)核性腦膜炎(TBM)模型

  • 動物:BALB/c小鼠。

  • 方法

    • 尾靜脈注射結(jié)核分枝桿菌(H37Rv株,10? CFU),4周后腦干出現(xiàn)肉芽腫。

2. 弓形蟲腦炎模型

  • 方法

    • 腹腔注射剛地弓形蟲(ME49株,102-103速殖子),慢性期(4周后)形成腦包囊。


四、腦脊髓炎動物模型構(gòu)建選擇與驗證要點(diǎn)

研究目標(biāo)推薦模型檢測終點(diǎn)
自身免疫脫髓鞘MOG??-??誘導(dǎo)EAE臨床評分、脊髓LFB染色
病毒感染致神經(jīng)損傷WNV顱內(nèi)接種病毒載量、神經(jīng)元凋亡
血腦屏障破壞機(jī)制過繼轉(zhuǎn)移EAE熒光s鈉滲透率、ZO-1蛋白表達(dá)
慢性神經(jīng)炎癥弓形蟲ME49感染腦包囊計數(shù)(PAS染色)、IFN-γ水平

五、注意事項

  1. 倫理與生物安全

    • 病毒模型需在BSL-2/3實(shí)驗室操作(如WNV為BSL-3)。

  2. 對照設(shè)計

    • 佐劑對照組(僅CFA+PTx)、空白對照組(PBS注射)。

  3. 動態(tài)監(jiān)測

    • EAE模型需每日評分,病毒模型監(jiān)測體重和神經(jīng)癥狀。



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